组培苗培养与管理.ppt

植物组织培养;项目五组培苗培养与管理;【知识点】

组培易发问题的原因与调控措施

组培苗培养条件，组培苗的特点，组培苗驯化方法

【技能点】

能解决组培易发问题，培养健壮组培苗

会进行组培苗移栽养护

素质要求：培养学生无菌意识、创新意识、团队合作意识和生态环保意识；具有任务执行力，规范操作、注意安全；科学严谨、实事求是的工作态度。;一、组培苗培养

1、培养程序

1）初代培养

指在组培过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段，即无菌接种完成后，外植体在适宜的光、温、气等条件下被诱导成无菌短枝（或称茎梢）、不定芽（丛生芽）、胚状体或原球茎的过程。也称为诱导培养。

由于外植体来源复杂，又携带较多的杂菌，初代培养一般是比较困难的，是植物组培成功的关键技术之一。

;2）继代培养

将初代培养诱导产生的愈伤组织、芽、苗、胚状体或原球茎等重新分割，接种到新配制的培养基上，进一步增殖扩繁的培养过程称为继代培养，也称增殖培养。

通过初代培养多获得的不定芽、无菌短枝、胚状体或原球茎等无菌材料被称为中间繁殖体。中间繁殖体可以按几何系数扩繁。;例如：2株苗为基础，每棵苗的繁殖系数为3（即一株苗剪成3段接种，培养一段时间后每段又形成3株苗），那么经过10代繁殖，将生成多少株苗？

2×310=118096;3）壮苗与生根

壮苗培养

生根培养：NAA和IBA是最常用于诱导生根的生长素，使用浓度一般为0.1-10.0mg/L。;2、组培苗培养条件

1）温度：培养室内的温度通常是控制在25±2℃。

2）光照：植物所需的光照强度为1000-5000lx，培养室每日光照10-16h。

3）湿度：容器内的湿度常可保持在100%，培养室的相对湿度一般应保持在70%--80%之间。

4）通气：在固体培养中，不要把培养物全部埋入培养基内，以避免氧气不足。培养室要适当通风换气，改善室内的通气状况，每次通风后要进行一次消毒，避免引起培养物污染。

;1.试管苗培养条件。

2.培养程序。;啊？？;二、组培污染的原因及防治

组培常见问题

;1、培养基污染来源与防治;（2）细菌污染;防治：

1、接种前，洗手，用70%酒精棉球擦???双手；戴口罩，不说话，防止呼吸时呼出的细菌所引起；每接一瓶材料后用酒精擦手指。;防治：

2、提高外植体灭菌技术，选取带菌少的材料，微生物少的季节和时间。

3、每个培养周期不宜过长。

4、培养瓶容器的封口类型。;防治：

5、接种用的工具每接一瓶至少要灼烧灭菌一次。

6、凡是污染材料，均要高压蒸汽灭菌，或用70%酒精杀菌，降低污染源。;（2）真菌污染;防治：

1、无菌室内安装空气循环过滤装置，通过紫外线照射灭菌。

2、超净工作台提前开机20min以达到空气的充分过滤灭菌。

3、接种，用70%酒精棉球擦拭双手，戴口罩，不聊天；每接一瓶后用酒精擦手指。;4、接种时要严格操作，接种工具要烧红，不碰触任何物品，打开瓶盖时动作要轻及去掉瓶塞后瓶子应拿成斜角等。

5、培养瓶容器的封口类型。

6、每个培养周期不宜过长。

7、凡是污染材料先高原蒸汽灭菌，或用70%酒精杀菌，降低污染源。

8、培养室安装净化设备，并勤开紫外灯灭菌，以及酒精喷雾和冰醋酸熏蒸灭菌。;

提问;2、培养常见问题及对策

1）污染

所谓污染是指在组织培养过程中，有细菌、真菌等微生物的侵染，在培养基的表面滋生大量菌斑，造成培养材料不能生长和发育的现象。;（1）污染识别

若污染菌类是零星分散在培养基中，则可确定是人为引起的污染。

若从培养基以下开始长菌，发生时间较早，且有从里向外的趋势，则说明是切口引起的污染。;若是外植体带菌，菌类从材料的培养基以上部位长起，且发生在5天以后，则说明是材料带的内生菌。;（2）来源

材料表面消毒不彻底，植物材料带入培养过程。

植物内生菌随材料带入培养过程。

无菌操作过程中外界环境进入培养容器造成。;（3）种类

细菌性污染：培养基某一位置或培养材料周围出现黏液状或浑浊的水渍状痕，有时呈现发酵状泡沫。接种后1-2天可见。

真菌性污染：培养基污染部位发霉，颜色黝黑、白、黄等。接种后3-5天或更长时间出现。;（4）污染的防止

选择合适的植物材料：幼嫩材料、温室材料、清洁材料、草本材料、中午阳光最强时的材料带菌少。

严格灭菌：对难灭菌材料采用多次灭菌法，对材料内部的细菌，可在培养基中添加抗生素来解决。;污染的防止

合理安排繁殖程序：将获得的无菌培养物一部分保存起来，分批繁殖和复检后再提供给大规模生产。

操作规范：培养室要求清洁、密闭、接种室要经常用紫外线照射、冰乙酸熏蒸、70%酒精喷雾杀菌等。;2）褐变

褐变（又称褐化）是指培养材料向培养基释放褐色物质，致使培