抗核抗体测定方法.pptx

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2024-01-26

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抗核抗体测定方法

目

CONTENTS

引言

抗核抗体基本知识

测定方法介绍

测定步骤详解

结果分析与解读

测定方法优缺点评价

总结与展望

录

01

引言

抗核抗体（ANA）是自身免疫性疾病的重要标志物，通过测定ANA可以帮助诊断相关疾病，如系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）等。

自身免疫性疾病的诊断

ANA滴度与某些自身免疫性疾病的活动度和预后相关，因此测定ANA有助于评估疾病状态和制定治疗方案。

疾病活动度和预后的评估

ANA测定在科研和临床试验中也有广泛应用，如研究自身免疫性疾病的发病机制、评估新药的疗效等。

科研和临床试验

目的和背景

间接免疫荧光法（IIF）

IIF是ANA测定的经典方法，使用荧光标记的抗人球蛋白抗体与待测血清中的ANA结合，形成荧光复合物，在荧光显微镜下观察核型并判断结果。IIF法具有较高的敏感性和特异性，但操作繁琐且需要经验丰富的技术人员进行判读。

酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA是一种定量测定ANA的方法，通过将ANA特异性抗原包被在固相载体上，加入待测血清和酶标记的二抗进行反应，最后通过底物显色来定量测定ANA。ELISA法具有操作简便、自动化程度高等优点，但可能存在一些非特异性干扰。

其他方法

除了IIF和ELISA外，还有一些其他方法可用于ANA测定，如免疫印迹法、免疫斑点法等。这些方法各有优缺点，适用于不同的临床和科研需求。

测定方法概述

01

抗核抗体基本知识

抗核抗体定义

抗核抗体（ANA）是一组针对细胞核内各种成分的自身抗体的总称，是筛选结缔组织病的主要试验。

ANA在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率，如系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）、混合性结缔组织病（MCTD）等。

根据抗核抗体所针对的细胞核成分不同，可分为抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体等。

不同成分的抗核抗体与不同的自身免疫病密切相关，如抗dsDNA抗体与SLE的活动性密切相关。

抗核抗体分类

VS

ANA阳性常见于自身免疫性疾病，如SLE、RA、MCTD等，也可见于慢性活动性肝炎、结核病、重症肌无力等。

ANA检测可作为自身免疫性疾病的初步筛选试验，对SLE的诊断、治疗和预后判断均有重要意义。

抗核抗体与疾病关系

01

测定方法介绍

将待测血清与固定的细胞核或细胞质抗原片反应，洗涤后加入荧光标记的二抗，再次洗涤后荧光显微镜下观察结果。

原理

灵敏度高，可检测多种自身抗体，且能定位抗原在细胞内的分布。

优点

操作繁琐，需要荧光显微镜等专用设备，且结果判读主观性强。

缺点

间接免疫荧光法

原理

01

将抗原或抗体包被在固相载体上，加入待测血清反应后洗涤，再加入酶标记的二抗或抗原，再次洗涤后加入底物显色，通过比色或分光光度计测定结果。

优点

02

操作简便，灵敏度高，可定量检测，适用于大规模样本筛查。

缺点

03

特异性相对较低，可能存在交叉反应，且对实验条件要求较高。

酶联免疫吸附法

免疫印迹法

将细胞提取物或重组抗原通过SDS分离后转印至膜上，与待测血清反应后通过显色或荧光检测抗体。该方法可检测多种特异性抗体，但操作繁琐且灵敏度相对较低。

免疫沉淀法

将待测血清与可溶性核抗原反应后形成免疫复合物沉淀下来，通过检测沉淀物的放射性或酶活性来判断抗体存在。该方法特异性高但灵敏度较低，且操作复杂。

化学发光免疫分析法

利用化学发光物质标记抗原或抗体，与待测血清反应后通过测量发光强度来判断抗体存在。该方法灵敏度高且可定量检测，但需要专门的化学发光仪器。

其他测定方法

01

测定步骤详解

抽取患者静脉血液，注意避免溶血和污染。

采集样本

分离血清

保存样本

将血液样本静置或离心，分离出血清备用。

将血清样本保存在-20℃或以下温度，避免反复冻融。

03

02

01

样本采集与处理

选择高质量的抗核抗体检测试剂盒，确保试剂的特异性和敏感性。

选择试剂

按照试剂盒说明书要求，将试剂从冰箱取出，平衡至室温，并准备好所需的其他试剂和耗材。

准备试剂

使用试剂盒提供的校准品和质控品，确保检测结果的准确性和可靠性。

校准品与质控品

结果判读

孵育

将反应板置于37℃恒温箱中孵育一定时间，使抗原抗体充分结合。

显色

加入酶标抗体和底物液，再次孵育并显色，形成有色产物。

终止反应

加入终止液终止反应，使有色产物保持稳定。

将待测血清样本加入到已包被抗原的反应孔中，同时设置阴阳性对照和空白对照。

加样

洗涤

用洗涤液充分洗涤反应板，去除未结合的抗原和抗体。

使用酶标仪读取各孔的光密度值，根据阴阳性对照和空白对照的结果判断样本的抗核抗体水平。

具体操作步骤

01

结果分析与解读